ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРСИСТЕНТНОЙ ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ
http://www.rusmedserv.com/dermatology/persist.htm
ЧАСТЬ 2
Таким образом, основным механизмом, препятствующим редифференциации РТ в ЭТ, является особый цитокиновый спектр ведущий к дефициту компонентов и/или блокаде синтеза белков наружной мембраны ЭТ хламидий под действием медиаторов персистенции (табл. 2). Это приводит к продолжению роста микроорганизма без соответствующего деления. Неполноценность наружной мембраны и клеточной стенки способствует увеличению интрацеллюлярного осмотического давления, ответственного за разбухание хламидийных структур.
Таблица 2. https://yadi.sk/i/NXTAZ9JY3Fx92J (после перехода по ссылке нажать на картинку, чтобы она раскрылась в более качественном виде)
При исследованиях на модели полярно-ориентированных клеток было показано [26], что хламидий не способны самостоятельно вторгаться глубоко в местные ткани. Для хламидий locus fixus - исключительно апикальная поверхность цилиндрических эпителиальных клеток, при этом и потомство выходит только из верхушечной части, не проникая не то что за базальную мембрану, но и в базо-латеральную часть клеток (рис. 3).
- Рисунок 3.png (68.64 КБ) 33712 просмотров
исунок 3. На тонкослойном церивкальном биоптате заметно хламидийное включение в цилиндрической эпителиальной клетке. Включение прижимает ядро к основанию клетки. Толуидиновый синий О окраска, фазово-контрастная микроскопия, увеличение Х 1000 (Courtesy of J Swanson).
При этом существует гипотеза, что местом персистенции является не постоянно обновляющийся эпителиальный слой слизистой, а субэпителиальные ткани, куда С. trachomatis проникают в профессиональных фагоцитах где и продолжают персистировать в лимфоцитарных герминативных центрах (рис. 2) под действием формирующих порочные круги факторов. Данное предположение позволило бы объяснить длительность персистенции и дефекты лабораторной диагностики, но для подтверждения этого аспекта, необходимо проведение дальнейших исследований.
К проблеме диагностики персистентной урогенитальной хламидийной инфекции
Рассмотрим все известные методы диагностики урогенитальной инфекции с позиции выявления персистентных форм:
I. Цитологические методы
а) Бактериоскопия
Учитывая низкую специфичность метода (не более 30 %)[7], этот метод на настоящем этапе лабораторной диагностики представляет скорее историческую, чем практическую ценность.
б) Электронная микроскопия
Информативный метод, позволяющий визуализировать персистентные формы хламидий. Недостатком метода является дороговизна и малая доступность для проведения обследования широкого круга пациентов. Материалом может служить не только эпителий слизистых половых путей доступных при физикальном обследовании, но и биопсийный материал из пораженных тканей (спайки, маточные трубы). При проведении исследования необходимо ориентироваться на наличие атипичных включений, при этом могут обнаруживаться [3,4,9]:
гигантские ретикулярные тельца с расширенным периплазматическим пространством;
деление протопласта ретикулярного тельца и отшнуровка мелких шаровидных форм в периплазматическом пространстве;
мелковакуолярные включения, лежащие на периферии клеток, медленно транспортирующиеся в перинуклеарную зону;
огромное количество мембранных пузырьков неправильной формы внутри ретикулярных телец.
в) Метод прямой иммунофлюоресценции
Не применим для диагностики персистентной инфекции, так как основан на обнаружении светящихся комплексов антигена возбудителя (МОМР и ЛПС), находящихся на поверхности элементарных телец хламидий, расположенных внеклеточно. При персистенции продукция МОМР и ЛПС блокирована [18], а элементарные тельца выявляются лишь в 8,2% случаев[5].
II. Метод культуры клеток
В одном пассаже на культуре клеток хламидии при персистентной инфекции, как правило, не выделяются вследствие неинфекционности и непродуктивности персистентных включений [4,5,18]. При многократном перевивании может наступить реверсия микроорганизмов с образованием типичных элементарных и ретикулярных телец в связи со снятием влияния факторов персистенции.
III. Серологические методы
Большую помощь в диагностике персистентной хламидийной инфекции оказывают методы серологии, основанные на выделении противохламидийных антител и их титра в сыворотке крови больного. Ведущая роль при этом отводиться реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с родоспецифическим диагностикумом. У лиц с персистентной инфекцией РНГА в 4 раза превышает диагностический титр. Не менее информативна и РНИФ с типоспецифичными антигенами.
В сомнительных случая полезным окажется исследование нарастания титра сывороточных антител, проведенное через 2 недели после первого.
Уровень противохламидийных антител класса IgG оказывается в 2,4 раза выше у лиц с экстрагенитальными проявлениями хламидийной инфекции, по сравнению с группой лиц с неосложненными хламидийными уретритами [171
При этом, нам кажется перспективным создание теста детекции антигена hsp 60 кДа, в связи с его гиперпродукцией при персистирующей инфекции. Эффективным и недорогостоящим, на наш взгляд, кажется создание тест-системы, основанной на выявлении белка теплового шока в выделениях из половых органов с помощью моноклональных антител, сорбированных на твердофазной основе. HSP 60 может быть наработан в инфицированной культуре клеток, инкубированных в условиях воздействия вышеприведенных медиаторов персистенции (табл. 2).
IV. Молекулярно-биологические методы
Данными методами часто можно обнаружить ДНК хламидии в фаллопиевых трубах [24], при этом достаточно часто при анализе мазков их уретры и цервикального канала результат теста - отрицательный, что не должно уводить врача в сторону от диагноза персистентной инфекции.
Таким образом, подводя итог оценки чувствительности диагностических тестов при персистентной урогенитальной хламидийной инфекции, следует рекомендовать:
Для постановки диагноза персистентной урогенитальной хламидийной инфекции больного необходимо обследовать одновременно двумя методами:
РНГА (ведущий в постановке диагноза)
ДНК-зондовая гибридизация (наличие отрицательного результата ДНК-ЗГ при высоком титре (более чем в 4 раза выше диагностического) хламидийных антител свидетельствует о персистирующей инфекции)
Необходимость иммунологического обследования
У больных с персистирующей инфекцией выявляются различные нарушения в иммунной системе, достоверно чаще эти нарушения проявляются в:
В-клеточном звене (снижение как относительного, так и абсолютного числа В-лимфоцитов);
дисбалансе иммунорегуляторного индекса (как в сторону повышения количества Т-хелперов, так и в сторону повышения числа Т-супрессоров);
уменьшении количества естественных киллеров;
гиперпродукции IgA2 (основного иммунологического маркера персистирующей хламидийной инфекции) [19,25],
гиперпродукция IgG (показатель менее специфический, но более доступный в наших лабораторных условиях) [17]
Рекомендуется определять концентрацию IgA2 в сыворотке крови. Её нормальная величина 0,091-0,518 г/л (0,56-2,81 мкмоль/л)
Но вопрос о необходимости проведения исследования иммунного статуса, с обязательным исследованием субпопуляций лимфоцитов (табл. 3) нельзя ставить как однозначно необходимым. Данное исследование необходимо для подбора индивидуальной иммунотерапии, а решение о её целесообразности должно основываться на выборе тактики ведения пациента.
- Таблица 3.png (75.71 КБ) 33712 просмотров
