Культивирование хламидий в куриных эмбрионах

[Billy]

Куриные эмбрионы имеют ряд преимуществ перед лаборатор-
ными животными:
1. Высокая чувствительность к широкому спектру вирусов (это
объясняется недостаточным развитием защитных механизмов, не об-
разуют антител в ответ на заражение).
2. Легкодоступный объект (большое количество птицефабрик и
инкубаториев).
3. Стерильность (так как скорлупа и подскорлупная оболочка
надежно защищают эмбрионы от бактериального заражения со сто-
роны внешней среды). Однако нельзя полностью исключить содер-
жание в них патогенных агентов (вирусного бронхита кур, гриппа,
лейкоза, ньюкаслской болезни и др.).
4. Экономичны (дешевы, не требуют ухода, кормления).

В вирусологии куриные эмбрионы используют:
1) для обнаружения в биологическом материале активного ви-
руса биопробой;
2) первичного выделения вируса и его культивирования;
3) поддержания вирусов в лаборатории в активном состоянии;
4) титрования вирусов;
5) накопления большой массы вирусов для лабораторных ис-
следований при производстве вакцин и диагностических тест-систем;
6) как тест-объект в реакции нейтрализации.

Эмбрионы доставляют из инкубатория, не допуская их охлажде-
ния в пути. В лаборатории эмбрионы инкубируют в термостате при
температуре 37° С и влажности 60-70 %, что достигается установле-
нием в термостате открытых широкогорлых сосудов с водой. Венти-
ляционные отверстия термостата должны быть открыты. Эмбрионы
размещают воздушной камерой вверх в специальных штативах. Ре-
комендуется до момента заражения дать возможность эмбрионам в
течение суток адаптироваться к новым условиям и нормализовать
свои функции после транспортного стресса. Если лаборатория распо-
лагает собственным инкубаторием, то снесенные курицей оплодотво-
ренные яйца пригодны для закладки в него в течение 10 дней.
Подготовка куриных эмбрионов к заражению включает овоско-
пирование и дезинфекцию скорлупы, а также соответствующую под-
готовку рабочего места. Овоскопирование представляет собой про-
смотр яиц против достаточно яркого источника света (овоскоп), в ре-
зультате чего на неосвещенной стороне скорлупы образуются тени от
внутренних структур

Заражение в желточный мешок.
Большей частью им пользуются для размно-
жения хламидий, а также вирусов болезни Марека,
ринопневмонии лошадей, катаральной лихорадки
овец и др. Заражают эмбрионы 5-7-дневного, а ино-
гда и 2-3-дневного возраста (вирус лихорадки до-
лины РИФ). Используют два варианта заражения.

Первый вариант. Эмбрионы помещают в штатив в вертикаль-
ном положении. Делают отверстие в скорлупе над центром воздуш-
ной камеры и вводят иглу на глубину 3,5-4 см под углом 45° к верти-
кальной оси в направлении, противоположном месту нахождения за-
родыша (рис. 7).
Второй вариант. Иногда аналогичный путь заражения осу-
ществляется на горизонтально укрепленном в штативе эмбрионе; при
этом зародыш находится внизу, а желток над ним. Отверстие в скор-
лупе закрывают каплей расплавленного парафина (см. рис. 4).

[Billy]

Методика изоляции хламидий

Для выделения из уретры и шейки матки и культивирования его в желточном мешке куриных эмбрионов необходимо иметь условия, обеспечивающие стерильную работу. Материалом для выделения служат соскобы из уретры и шейки матки, которые предварительно микроскопируют с целью обнаружения элементарных телец и внутриклеточных включений.
Использование вирусоскопии и цитоскопии иногда уже позволяет установить хламидийную природу цервицитов и уретритов. Но чаще всего наряду с этим необходимо производить заражение развивающихся 7-8 дневных куриных эмбрионов.
Соскобы из уретры, шейки матки женщин и уретры мужчин берут по возможности стерильно по общеизвестной методике.
Соскобный материал, полученный из урогенитального тракта больных помещают в пенициллиновые флаконы, содержащие по 2 мл изотонического раствора натрия хлорида или фосфатного буфера (pH 7,2) с антибиотиками: стрептомицина 500 ЕД/мл, ристомицина 125 ЕД/мл, мицерина 200 ЕД/мл и мономицина 250 ЕД/мл. Указанные выше антибиотики используют для борьбы с бактериальным загрязнением, то есть для очистки инокулята. Эти антибиотики заметно не влияют на жизнеспособность возбудителя урогенитальной инфекции.
Соскобный материал, помещенный в фосфатный буфер или изотонический раствор натрия хлорида с антибиотиками, не содержащий пенициллина, до заражения куриных эмбрионов может сохраняться при температуре -20 гр. ц. до 3 месяцев, а при 2 или 4 г.ц.
- не более 15 дней. Однако желательно, чтобы срок хранения инокуляров при 2 г.ц. или 4 г.ц. не превышал 7 дней.
Перед заражением куриных эмбрионов в желточный мешок, инокулят (соскобный материал) проверяют на стерильность, используя для этого мясопептонный и глюкозный бульоны, среды Сабуро, Китта-Тароцции и, для выявления микоплазм, полужидкий 0,3 % агар и триптический перевар бычьего сердца с 10% лошадиной неинактивированной сывороткой.
Инокуляты, инфицированные какой-либо микрофлорой, от которой не удалось освободиться с помощью антибиотиков, для заражения куриных эмбрионов не используются.

[Billy]

https://fastpic.ru/view/112/2020/0526/_ ... 0.jpg.html
https://fastpic.ru/view/112/2020/0526/_ ... b.jpg.html
https://fastpic.ru/view/112/2020/0526/_ ... 1.jpg.html
https://fastpic.ru/view/112/2020/0526/_ ... 8.jpg.html
Провожу эксперименты.
Первую партию испортил, у второй партии куриные эмбрионы развиваются, на 8 день произвел заражение в желточный мешок.
Посмотрим, что выйдет.