Авторы: Морева Ж.Г., Васильев М.М., Припутневич Т.В., Сащенко В.П.
Источник: https://www.con-med.ru/magazines/gyneco ... lnymi_zab/
Фото атипичных форм трихомонад:
https://yadi.sk/i/wkh99A8h3TjUgz (рис. 1, 2, 3)
https://yadi.sk/i/kXoD3IKX3TjUgy (рис. 4, 5)
https://yadi.sk/i/R9Z03Lxx3TjUh9 (рис. 6, 7, 8 )
https://yadi.sk/i/pFR-SSH93TjUh3 (рис. 9)
https://yadi.sk/i/so2hL5LO3TjUhL (10, 11)
https://yadi.sk/i/BSnQQOzl3TjUhD (рис. 12, 13)
Часть 1.
Резюме
Представлены результаты анализа морфологии форм Trichomonas vaginalis, выделенных микроскопическим и культуральным методами от гинекологических больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза, а также форм трихомонад, выращенных в питательной среде в условиях эксперимента. Показано, что у больных женщин вместе с типичными формами возбудителя выявлены атипичные клетки трихомонад, которые характеризовались неоднородными оптическими свойствами, что микроскопически наблюдалось в виде светлых дифракционных линий поверхностного слоя оболочки. Наличие в мазках у больных на фоне типичных форм трихомонад атипичных клеток возбудителя свидетельствует об адаптивных свойствах T. vaginalis при хроническом воспалительном процессе.
Ключевые слова: трихомониаз, атипичные формы трихомонад, оптические свойства оболочки трихомонад.
Сведения об авторах
Морева Жанна Германовна – ст. преподаватель каф. микробиологии и вирусологии ГБОУ ВПО Ивановская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ
Васильев Михаил Михайлович – д-р мед. наук, проф., науч. сотр. отд. инфекционных урогенитальных заболеваний ФГБУ ГНЦ дерматовенерологии и косметологии Минздравсоцразвития РФ
Припутневич Татьяна Валерьевна – канд. мед. наук, зав. лаб. микробиологии ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздравсоцразвития РФ
Сащенко Владимир Петрович – врач акушер-гинеколог гинекологического отделения Отделенческой больницы на станции Иваново ОАО «РЖД» Урогенитальный трихомониаз является наиболее распространенной протозойной инфекцией, передаваемой половым путем. Паразитическим не внутриклеточным Protozoa не свойственна тенденция к морфофизиологическому регрессу, в связи с этим паразитизм у простейших является прогрессивной ветвью их эволюции. Одним из проявлений паразитического морфогенеза возбудителя является его способность к полиморфизму [1]. Способность изменять свою форму в ходе жизненного цикла ярко выражена у влагалищных трихомонад.
Основной формой существования Trichomonas vaginalis является жгутиковая грушевидная форма. При изменении условий существования в культуре или макроорганизме происходит трансформация типичных клеток трихомонад в атипичные формы. Отмечено, что через 6 ч после начала контакта с эпителиальными клетками in vitro типичные грушевидные формы переходят в амебоидные клетки, становясь плоскими, тонкими [2]. Установлено, что амебоидные формы, обладая наибольшим цитопатическим эффектом [3, 4], in vitro вызывают разрушение до 93% клеток монослоя [5], а in vivo повреждают до 50 поверхностных слоев эпителия [6]. Амастиготной формой существования T. vaginalis считают округлую, почкующуюся форму. Округлые безъядерные формы были выделены у мужчин с симптомами уретропростатита [7], а также при асимптомном и латентном течении трихомониаза.
В исторических данных упоминается, что первое описание атипичных форм трихомонад сделано в 1894 г. ученым F.Marchand (цит. по П.П.Семенову, В.П.Семенову, 1972) [8]. Экспериментаторы выявляли очень крупные особи трихомонад, достигающие в размере до 100 мкм [9], а также округлые формы размером до 20 мкм, без жгутиков и ядра, заполненные гомогенной массой, называемые «гиалиновые формы», отличающиеся резистентностью к протистоцидной терапии [10]. М.М.Васильев (1990 г.) наблюдал «голубые» формы возбудителя, часто с зернистым содержимым, четко выраженной, не однослойной оболочкой [11]. Ученые выделяли из уретры мужчин, безуспешно лечившихся по поводу трихомониаза, шизоидные формы возбудителя [12], M.Whittington (1954 г.) наблюдал подобные формы с 65 ядрами в культуре (цит. по П.П.Семенову, В.П.Семенову, 1972) [8], а in vitro шизогонию индуцировали под влиянием нитрозогуанидина [13].
Форма трихомонад у больных женщин может меняться в зависимости от полового цикла, от возрастных особенностей женщины, связанных с изменением гормонального фона [14]. На размеры трихомонад влияет длительность персистенции инфекции в макроорганизме, состояние микробиоценоза половых органов, наличие сопутствующих заболеваний [15]. Морфология влагалищных трихомонад зависит от условий культивирования и состава питательных сред [16].
Исследователи наблюдали in vitro изменение морфологии трихомонад под влиянием гризеофульвина, мебендазола, фибронектина, цитохалазина В, гидроксиуреи, колхицина [17–20]. Под воздействием гризеофульвина in vivo в клетках трихомонад происходила фрагментация ядер, появлялись крупные вакуоли, простейшие теряли подвижность, а in vitro менялась форма гидрогеносом, изменялись не только морфологические свойства клеток, но и фагоцитарные, адгезивные и антигенные особенности.
Изменение морфологии типичных клеток T. vaginalis с последующим округлением и почкованием особей описывают при воздействии лазерного облучения [21], а также различных доз ультрафиолетового излучения [22]. Появление амебоидных форм ученые наблюдали при моделировании трихомонадной инфекции на крысах [23], а округлые неподвижные формы трихомонад получали из типичных клеток с последующей реверсией их снова в подвижные типичные формы [24].
Наличие атипичных форм трихомонад в клиническом материале создает трудности при лабораторной диагностике трихомониаза. У атипичных форм T. vaginalis отсутствуют основные морфоидентификационные признаки, характерные для типичных клеток: грушевидная форма с интенсивно окрашенным эксцентрично расположенным ядром на фоне нежно-ячеистой цитоплазмы и при просмотре нативных препаратов или культуры – наличие подвижности.
Поэтому была предпринята попытка выявить по морфологическим и культуральным признакам типичные и измененные формы T. vaginalis, полученные из клинического материала, а также in vitro при определенных условиях культивирования.
Материалы и методы
Для изучения морфологии влагалищных трихомонад обследованы 85 женщин в возрасте от 20 до 62 лет (средний возраст составил 39,9 года) с хроническими воспалительными заболеваниями органов малого таза (ВЗОМТ), являющихся пациентками гинекологического кабинета железнодорожной больницы (Иваново). У 38,82% больных имелись клинические проявления аднексита, у 25,88% женщин – субсерозно-интерстициальной миомы матки, у 17,65% пациенток – эктопии шейки матки, у 12,94% пациенток – кольпита, у 2,35% больных – метроэндометрита, у 1,18% обследованных – бластомы тела матки в сочетании со спаечным процессом, у 1,18% пациенток – железисто-кистозной гиперплазии эндометрия в сочетании с цистоцеле. Ярко выраженные клинические признаки при осмотре в виде усиленных выделений и гиперемии наблюдались у 55,33% больных.
Пациенткам проведена диагностика урогенитального трихомониаза и сопутствующих бактериальных возбудителей и грибов. Комплекс лабораторных методов включал микроскопический анализ мазков, взятых из заднего свода влагалища (V) и цервикального канала (С), нативных и окрашенных по Граму, Май–Грюнвальду–Романовскому, по Пику–Якобсону, простым способом с использованием анилиновых красителей, исследование С выделений культуральным способом, методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) и непрямой реакции иммунофлюоресценции (нРИФ). Культуральную диагностику трихомониаза осуществляли при использовании среды Тераса с добавлением обогащающих веществ. В случае слабого роста трихомонад в культуре делали повторные пересевы. В условиях эксперимента морфологию T. vaginalis изучали культурально в среде Тераса при добавлении 2,5% растворов гормональных препаратов синестрола и прогестерона в соотношении 1:10.
Морфологию трихомонад под воздействием антисептиков изучали in vitro при влиянии 0,01% раствора мирамистина. Идентификацию измененных форм трихомонад проводили: культурально, путем серийных пересевов на новую обогащенную питательную среду, было сделано более 7 пересевов, наблюдали рост подвижных жгутиковых форм; при помощи нРИФ (набор для флюоресценции ТрихоСкан, «ЛабДиагностика», Москва); при помощи ПЦР с использованием тест-системы AmpliSens производства ЦНИИ эпидемиологии, Москва, тест-системы для диагностики трихомониаза производства Института молекулярной генетики – ИМГ (Москва). ПЦР ставили в лаборатории молекулярной диагностики ИМГ. Размеры трихомонад измеряли при помощи окулярного микрометра. Микрофотографирование проводили с использованием цифровой фотокамеры Webbers MYscope 300M, электронного микроскопа просвечивающего типа ЭМВ 100Л¥10 000), применяя метод реплик. Всего было проведено более 500 различных исследований.
